BSA(牛血清白蛋白)检测试剂盒
日期:2021-01-15 01:36 人气:
Catalog_no | BF03097-96T |
Product_name | BSA(牛血清白蛋白)检测试剂盒 |
Size | 96T |
Category | ELISA检测试剂盒 |
Price | 2800 |
说明书 |
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此定量检测牛血清白蛋白(BSA)酶联免疫试剂盒,采用抗BSA的单克隆配对抗体,分别作为包被抗体和检测抗体,组成双抗体夹心ELISA检测试剂盒,并与美国标准局的BSA标准品为参照标准,本试剂盒最低可检测到1ng/mL的BSA。
2、 试剂盒组份:
2.1抗BSA单克隆抗体包被的96孔板条: 1块
2.2 BSA标准品:32ng/mL、16ng/mL、8ng/mL、4ng/mL、
2ng/mL、1ng/mL、0ng/mL 各1瓶(0.4mL/瓶)
2.3 BSA内部参比(20ng/mL): 1瓶(0.4mL/瓶)
2.4 TMB底物显色液: 1套(A和B各6.5mL)
2.5显色底物终止液(2N,H2SO4): 1瓶(13mL)
2.6样品稀释液 1瓶(13mL)
2.7洗涤液(10倍浓缩): 1瓶(50mL)
2.8使用说明书: 1份
2.9酶标记抗BSA抗体: 1瓶(0.13mL)
2.10酶标记抗体稀释液: 1瓶(13mL)
3、保存:
本试剂盒应于2-8℃保存,有效期6个月。
4、所需仪器:
酶标仪(波长450nm),10μL、100μL、1mL移液器,300μl多道移液器,移液器吸头、37℃恒温水浴箱。
5、操作步骤:
5.1将浓缩洗涤液用蒸馏水做10倍稀释。
5.2取出包被有抗BSA的96孔酶标板在室温放置回温。标准品各浓度做平行两孔,50μL/孔加入酶标板中。加待检样品、内部参比,各两孔,50μL/孔。然后将酶标记抗体用酶标抗体稀释液做1:100稀释,加入各反应孔,100μL/孔(酶标记抗体用多少稀释多少,现用现配)。加样过程须在15分钟内完成。
5.3置室温20~24℃避光反应1小时,用洗涤液洗涤四遍,拍干。
5.4用移液器加TMB底物显色液100μL/孔,请勿震荡,室温20~24℃避光反应10分钟。
5.5用移液器加终止液100μL/孔,稍微震荡5s混匀。
5.6在酶标仪450nm波长处读数。
6、注意事项:
6.1如样品中BSA含量高于32ng/mL,可将样品做适当稀释。
6.2样品如为冻干制剂,应用样品稀释液充分溶解混匀。
6.3反应时应将整板放入洁净的密闭空间中,为防止反应孔中落入异物。
6.4洗涤拍干后,应消除各孔内残余的气泡。
6.5开封后,将未使用的板条放回加入干燥剂的密封塑料袋中,置4℃密闭保存。
6.6在操作过程中,所使用的移液器吸头、洗涤机(瓶)、器皿等均应严格避免被有BSA的环境和物品污染。
7、结果判定:
7.1实验有效参数:
实验结果须满足以下有效参数为成立:
0ng/mlOD值≤0.1; 32ng/mlOD值≥0.80; 阳性参考18~22ng/ml; R2≥0.98;
7.2计算:
在EXCEL里面以标准浓度为横坐标,消零OD值为纵坐标作散点图,添加趋势线,再显示曲线方程和R2值,将检测样品OD值消零处理后带入直线方程计算对应的浓度。
标准浓度 | OD1 | OD2 | OD3 | 平均值 | 消零OD |
0 | 0.069 | 0.062 | 0.064 | 0.065 | 0 |
1 | 0.111 | 0.109 | 0.113 | 0.111 | 0.046 |
2 | 0.13 | 0.127 | 0.131 | 0.129 | 0.064 |
4 | 0.191 | 0.192 | 0.193 | 0.192 | 0.127 |
8 | 0.332 | 0.319 | 0.327 | 0.326 | 0.261 |
16 | 0.583 | 0.588 | 0.596 | 0.589 | 0.524 |
32 | 1.039 | 1.025 | 1.054 | 1.039 | 0.974 |
7.3判定:
在标准曲线中,设OD0~16ng/mL为区间A;OD16~32ng/mL为区间B;大于OD32 ng/mL为区间C。
7.3.1如测得的OD值小于标准曲线中2ng/mL对应OD值,则BSA含量测定结果计为小于2ng/mL。
7.3.2如不同稀释浓度的样本测得的OD值均位于区间A,则最终结果计算取其最低稀释度的测定值。
7.3.3如不同稀释度的测定值均位于区间B或同时位于区间A和B或同时位于区间B和C,则取其最接近OD16ng/mL的测定值。
7.3.4如不同稀释度测定值均位于区间C,则需将样本做进一步稀释测定,使其测定值居2~32ng/mL所对应的OD值区间,计算方法按上述7.3.2-4。
7.3.5如高稀释度测得OD高于低稀释度或未稀释的样本OD,则可能是操作失误或样本中BSA含量过高(HOOK效应),需重试或调整稀释度。
7.3.6最终结果要考虑稀释因素(实际BSA含量=计算值X稀释倍数)。
8、本试剂盒技术指标
8.1检测限和定量限
检测限:零浓度标准品加上两倍的标准差(20个零孔计算值),本试剂盒检测限计算为0.2ng/mL(ppb)。定量限为标准曲线检测下限,1 ng/mL。
8.2准确度和精密度
计算批内批间变异系数,在高中低三个浓度(20、10、5)下五个重复检测计算批内变异系数,不同时间重复三次计算批间变异系数,CV%均小于10%。
批间 | 批内 | ||||||
浓度(ng/ml) | SD | 回收率% | CV% | 浓度(ng/ml) | SD | 回收率% | CV% |
20 | 0.06 | 107.3 | 5.6 | 20 | 0.047 | 102.6 | 4.6 |
10 | 0.049 | 105.4 | 4.7 | 10 | 0.022 | 101.2 | 2.2 |
5 | 0.059 | 99.66 | 5.9 | 5 | 0.028 | 97.6 | 2.9 |
8.3交叉反应
本试剂盒对人血白蛋白,小鼠血清,兔血清,鱼明胶没有交叉反应,而对山羊血清有10%的交叉反应(以相同OD值时BSA和山羊血清的浓度的比值的百分数为准)。
和BSA没有交叉反应的物质 | |
反应物质 | 反应浓度 |
人血白蛋白 | 10mg/ml |
小鼠血清 | 10% |
兔血清 | 10% |
鱼明胶 | 1% |
8.4钩状效应
当样品浓度远高于标准曲线最高浓度的时候,会产生HOOK效应,即反应OD值小于32ng/mL的BSA时候的浓度,本试剂盒为500μg/mL以上。