水佐剂:快速制备小鼠单克隆/多克隆抗体

日期:2019-06-22 00:25 人气:

水佐剂是一种用于制小鼠单克隆抗体和多克隆抗体的免疫佐剂,与常规使用的弗氏佐剂相比,具有免疫针次少、抗原用量低、抗体产生快、抗体滴度高、抗体亲合力高、不破坏抗原天然构象和使用方便等优点。

 

水佐剂

 

一、水佐剂使用重要提示

 

1、水佐剂只需两针免疫,无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备,与弗氏佐相比可至少减少两针次免疫。

 

2、水佐剂通过减少免疫针次和降低每针次抗原用量,从而可大大节省总抗原用量。推荐使用的抗原用量为(1)免疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg(通常为10~20μg);(2)免疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg(通常为1~2μg)。

 

3、水佐剂抗体产生快,抗体滴度高,抗体亲合力高,无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备,只需要在三周内进行两针免疫,通在第五周即可获得ELISA滴度高1:10000~1:10000000的高亲合力抗体水平。

 

4、水佐剂不破坏抗原天然构象,从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克隆抗体,这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。

 

5、水佐剂是一种水溶性佐剂,使用时不需要弗氏佐剂的复杂化过程,抗原和佐剂只需简单混合即可用于免疫动

 

6、水佐剂使用肌肉免疫途径,与常规小鼠单克隆抗体制备过程中使用足垫免疫内免疫相比,极大地方便了使用。

 

7、水佐剂的最重要用途是可方便地用于制备小鼠多克隆抗体。常规多克隆抗体制备多使用兔子不但免疫针次多、抗原用量大和抗体产生慢,而且由于技术要求较高而往往需要委托外单位制备。使用快速水溶免疫佐剂,任何动物验人员均可方便快速地制备小鼠多克隆抗体,只需要简单地免疫5小鼠,即可在五周后获得1ml高质量的小鼠多克隆抗体。

 

8、水佐剂建议室温运输,2~8oC保存,无菌取用,有效期6个月。

 


二、水佐剂免疫步骤

 

步骤一:用生理盐水将抗原稀释到2倍最终浓度。注:推荐使用的抗原用量为(1)免疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg(通常为10~20μg);(2)免疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg(通常为1~2μg)。

 

步骤二:充分混匀佐剂,无菌条件下取出所需量与抗原按体积比1:1速混匀。备注:本佐剂产生沉淀属正常现象,与抗原混合操作越快越好。

 

步骤三:通过后腿小腿肌肉注射免疫小,每只小鼠100μl。备注:本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象,抽入针管前应充分混匀,抽入针管后应尽快注射。

 

步骤四:第21天按同样方式加强免疫一针。备注:每次佐剂和抗原现配现用。

 

步骤五、第35天采微量尾血进行ELISA测定,抗体滴度应在1:10000~1:10000000 范围内, 随后即可摘眼球采全血或进行脾细胞融合。备注:若极偶尔情况下抗体滴度达不到实验需求,可在第42天再按同样方式加强免疫一针。


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