其他亲和纯化填料

Catalog_noBDTL0020-10
Product_name内毒素去除层析介质 Endotoxin Removal Beads
Size10ml
Category纯化试剂
Price1820.00
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    1. 产品介绍
        内毒素去除层析介质是一种用于去除生物源蛋白类产品(包括多肽、抗体、多糖等)中内毒素的产品。它是将修饰过的多粘菌素B连接至4%琼脂糖微球上,特异性去除内毒素,可将样品中内毒素降低至0.1EU/ml,样品回收率高。具体性能见表1。
     
    表1. Endotoxin Removal Beads产品性能
    性能 指标
    基质 4%琼脂糖微球
    配体 修饰过的多粘菌素B
    载量 >2,000,000EU/ml 介质
    粒径 (μm) 45-165
    最大流速 0.1 MPa, 1 bar
    pH 稳定范围 5-10
    可耐受试剂 20%DMSO,20%乙醇,20%甘油;1M尿素,300mM咪唑;0.05% Tween 20, 10mM DTT等
    储存缓冲液 20% 乙醇
    储存温度 2-8℃
     
    2. 内毒素去除流程
    2.1 Buffer的准备
    所有用水和及耗材均需无热源产品,防止在使用过程中引入内毒素。
    • 平衡液: 20mM 磷酸盐,0.15M NaCl,pH7.4
    • 再生液:1% Triton X-114
    注: 结合液和洗脱液可根据样品性质进行改变,建议pH7-8,NaCl约0.15M-0.5M。
    2.2 样品准备
    1. 样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
    2. 样品PH最好控制在pH7-8,因为内毒素结合至柱子上的最佳pH为6-9。
    3. 样品最好控制适当的离子强度,减少非特异性吸附,如0.15-0.5M的NaCl。
    2.4 样品纯化
    1. Endotoxin Removal Beads充分混匀,用无热源枪头吸取适量浆液(以1ml为例)加入至层析柱中,打开下出口去掉保护液。用3ml的再生液清洗,控制流速在0.25ml/min,或每分钟小于10滴。重复至少两次,确保柱子中无内毒素。
    2. 用3ml的平衡液平衡柱管内壁及层析介质,流干,流速约0.5ml/min,重复至少两次。
    3. 将样品加到平衡好的Endotoxin Removal Beads中,调节流速在0.25ml/min,或每分钟小于10滴,当流出液流出约1ml时,开始收集流出液,流干后加入1ml平衡液继续收集。检测样品中内毒素含量及样品回收率。
    4. 如果样品中内毒素含量仍高于目标值,继续重复1-3。
    3. 问题及解决方案
    问题 原因分析 推荐解决方案
    内毒素去除效率低 样品pH值不在内毒素结合范围内 用0.1MNaOH或0.1M HCl调节pH7-8
    样品与层析介质接触时间短 减少流速,增加样品接触时间
    去除或检测系统被内毒素污染 所有试验用品均需无热源产品
    内毒素与目的蛋白结合较强 优化样品pH,使样品与内毒素分离;
    增加接触时间
    样品被污染 层析介质纯化过其他样品 不要用使用过的层析介质去除不同样品的内毒素
    样品回收率低 样品非特异性吸附在层析介质上 增加样品和平衡液中的NaCl浓度
    目的蛋白与内毒素结合一起被去除 优化样品pH,使样品与内毒素分离;
     
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