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    Catalog_noBDTL0020-10
    Product_name内毒素去除层析介质 Endotoxin Removal Beads
    Size10ml
    Category纯化试剂
    Price1820.00
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      1. 产品介绍
          内毒素去除层析介质是一种用于去除生物源蛋白类产品（包括多肽、抗体、多糖等）中内毒素的产品。它是将修饰过的多粘菌素B连接至4%琼脂糖微球上，特异性去除内毒素，可将样品中内毒素降低至0.1EU/ml，样品回收率高。具体性能见表1。
       
      表1. Endotoxin Removal Beads产品性能
      性能 指标
      基质 4%琼脂糖微球
      配体 修饰过的多粘菌素B
      载量 >2,000,000EU/ml 介质
      粒径 (μm) 45-165
      最大流速 0.1 MPa, 1 bar
      pH 稳定范围 5-10
      可耐受试剂 20%DMSO,20%乙醇,20%甘油；1M尿素,300mM咪唑；0.05% Tween 20, 10mM DTT等
      储存缓冲液 20% 乙醇
      储存温度 2-8℃
       
      2. 内毒素去除流程
      2.1 Buffer的准备
      所有用水和及耗材均需无热源产品，防止在使用过程中引入内毒素。
      • 平衡液: 20mM 磷酸盐，0.15M NaCl，pH7.4
      • 再生液：1% Triton X-114
      注: 结合液和洗脱液可根据样品性质进行改变，建议pH7-8，NaCl约0.15M-0.5M。
      2.2 样品准备
      1. 样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
      2. 样品PH最好控制在pH7-8，因为内毒素结合至柱子上的最佳pH为6-9。
      3. 样品最好控制适当的离子强度，减少非特异性吸附，如0.15-0.5M的NaCl。
      2.4 样品纯化
      1. 将Endotoxin Removal Beads充分混匀，用无热源枪头吸取适量浆液（以1ml为例）加入至层析柱中，打开下出口去掉保护液。用3ml的再生液清洗，控制流速在0.25ml/min，或每分钟小于10滴。重复至少两次，确保柱子中无内毒素。
      2. 用3ml的平衡液平衡柱管内壁及层析介质，流干，流速约0.5ml/min，重复至少两次。
      3. 将样品加到平衡好的Endotoxin Removal Beads中，调节流速在0.25ml/min，或每分钟小于10滴，当流出液流出约1ml时，开始收集流出液，流干后加入1ml平衡液继续收集。检测样品中内毒素含量及样品回收率。
      4. 如果样品中内毒素含量仍高于目标值，继续重复1-3。
      3. 问题及解决方案
      问题 原因分析 推荐解决方案
      内毒素去除效率低 样品pH值不在内毒素结合范围内 用0.1MNaOH或0.1M HCl调节pH7-8
      样品与层析介质接触时间短 减少流速，增加样品接触时间
      去除或检测系统被内毒素污染 所有试验用品均需无热源产品
      内毒素与目的蛋白结合较强 优化样品pH，使样品与内毒素分离；
      增加接触时间
      样品被污染 层析介质纯化过其他样品 不要用使用过的层析介质去除不同样品的内毒素
      样品回收率低 样品非特异性吸附在层析介质上 增加样品和平衡液中的NaCl浓度
      目的蛋白与内毒素结合一起被去除 优化样品pH，使样品与内毒素分离；
       
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