其他Elisa试剂盒

Catalog_noBDEL-0813
Product_name人β淀粉样蛋白(Aβ1-42)酶联免疫吸附检测试剂盒
Size96T
CategoryELISA检测试剂盒
检测范围15ng-500pg/mL
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    人β淀粉样蛋白(Aβ1-42)酶联免疫吸附检测试剂盒
    预期用途:用于体外定量检测人脑脊液中 Aβ1-42 浓度
     
    货号 规格
    BDEL-0813 96T
     

    试剂盒组成

    序号

    名称

    规格数量

    储存温度

    1

    人 Aβ1-42 标准品

    5 ng/管,2 管

    2-8 ℃

    2

    酶标板(可拆卸)

    1 块

    2-8 ℃

    3

    浓缩洗涤液(20×)

    20 mL/瓶

    2-8 ℃

    4

    稀释液

    20 mL/瓶

    2-8 ℃

    5

    检测抗体

    10 mL/管

    2-8 ℃

    6

    TMB 底物

    20 mL/瓶

    2-8 ℃

    7

    终止液

    10 mL/瓶

    2-8 ℃

    8

    封板覆膜

    2 张

    2-8 ℃

     
    储存条件:2-8 ℃。
    有效期:12个月,标准品溶解后,分装保存于-80 ℃,避免反复冻融,应 1 月内用完。
     
    一、检测原理
    本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法。用捕获抗体包被酶标板,实验室样品或标准品中的 Aβ1-42 会与捕获抗体结合,游离成分被洗去。加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体,形成抗体-抗原-抗体的免疫复合物,游离成分被洗去。加入显色底物TMB,TMB 在 HRP 的催化下显现蓝色,加终止液后变为黄色。用酶标仪在 450 nm 波长处测 OD 值,Aβ1-42 浓度与 OD450 值之间呈线性关系,绘制淀粉样蛋白标准曲线,通过代入公式计算出样品中 Aβ1-42 浓度。
     
    二、样品要求
    脑脊液收集后 1000 ×g 离心,20 min,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。样品收集后如不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-80 ℃,避免反复冻融。
    三、检测方法:
    检测前准备工作:
    1.    请提前 20 分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温.
    2.    将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:19),未用完的放回 4 ℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,可用 40 ℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超过 50 ℃ ,使用时洗涤液应为室温),当日使用。
    3.    标准品:平衡至室温,轻轻打开瓶盖,加入稀释液 1 mL 至冻干标准品中,盖好管盖,静置 10 min,上下颠倒数次,待其充分溶解后,用移液器将其轻轻混匀(浓度为 5 ng/mL)。然后根据需要进行倍比稀释(注: 不要直接在反应孔中进行倍比稀释,建议配制成以下浓度:500、 250、125、62.5、31.25、15.6、0 pg/mL,稀释液直接作为空白孔 0 pg/mL。取 100 μl 5 ng/mL 的标准品加入含有 900μL 稀释液的 EP 管中,混匀即可配成 500 pg/mL 的标准品,其余浓度依次进行倍比稀释。

     
    洗涤方法:
    1 自动洗板机:每孔加入洗涤液 300 µL,注入与吸出间隔 60 秒。
    2 手工洗板:甩尽孔内液体。在洁净的吸水纸上拍干,每孔加洗涤液 300 µL, 浸泡 3 分钟,吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体,在厚的吸水纸上拍干。
     
    操作步骤:
    实验开始前,各试剂均应平衡至室温;试剂或样品配制时,均需充分混匀,并尽量避免起泡。
    1.加样:
    a. 分别设标准孔,空白对照孔,待测样品孔。空白对照孔加入稀释液 50 µL, 其余标准孔、待测样品孔每孔分别加入 50µL 标准品或待测样品
    b. 空白对照孔加入稀释液 50 µL, 其余标准孔、待测样品孔每孔分别加入 50µL 检测抗体。
    c. 轻轻晃动混匀,给酶标板覆膜。室温孵育 1.5 h。
    d. 弃去孔内液体,甩干,1×洗涤液洗板 5 次。
    2.加显色底物
    a. 每孔加入显色底物(TMB)100µL。
    b. 室温避光孵育 15-30 min,当标准孔出现明显蓝色梯度时,即可终止。  
    注意:TMB 不能接触铝制容器或其它金属材料
    3.加终止液  
    每孔加入终止液 50µL。终止反应,此时蓝色立转为黄色。
    4.读数
    立即用酶标仪在 450 nm 波长测量各孔的光密度值(OD 值)。酶标仪应根据需要提前预热。
    参考值:
    由于实验操作条件的不同(如操作者,移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的 OD 值会有所差异。 以下数据和曲线仅供参考,实验者需要根据自己的实验建立标准线。

     
    四、检验结果的解释
    1. 每个标准品的 OD 值减去空白孔的 OD 值后作图,如设置复孔,则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,绘制标准曲线。
    2. 推荐使用专业的曲线制作软件,如 curve expert 1.3 或 1.4,在软件界面即可根据样品 OD 值,由标准曲线查出相应的浓度,乘以稀释倍数;亦可将样品的 OD 值代入标准曲线的拟合方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
    3. 若样品浓度高于标准曲线上限,应适当稀释后重新测定,计算浓度时乘以相应的稀释倍数。
     

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